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超声波细胞破碎仪厂家介绍常见的细胞破碎法

 发布时间:2015-08-13 点击量:828
   超声波细胞破碎仪是zui常见的细胞破碎仪器,上海生析超声仪器有限公司是专业的超声波细胞破碎仪厂家,本文就给大家介绍下常见的细胞破碎方法。

  超声波细胞破碎仪厂家介绍常见的细胞破碎的方法有:

  (一)物理破碎法,指利用温度差、压力差或超声波等将细胞破碎开来。

  1.用一定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞急剧震荡破裂(借助超声的震动力破碎细胞壁和细胞器)。

  机制:可能与强声波作用溶液时,气泡产生、长大和破碎的空化现象有关,空化现象引起的冲击波和剪刀力使细胞裂解。

  超声波细胞破碎仪的效率取决于声频、声能、处理时间、细胞浓度和细胞类型等。

  2.高压破碎:细胞悬浮液从高压室的环状隙喷射到静止的撞击环上,被迫改变方向经出口管流出。此过程中细胞经历了高速造成的剪切的碰撞及高压到常压的变化,从而破碎释放内含物。

  这是一种温和的、彻底破碎细胞的较理想的方法。

  3.反复冻融法:将细胞在-20度以下冰冻,室温融解,反复几次,由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀,使细胞结构破碎。

  (二)化学破碎法,指利用甲醛、丙酮等有机溶剂或表面活性剂作用于细胞膜,使细胞膜的结构遭到破坏或透性发生改变 。

  有些动物细胞,例如肿瘤细胞可采用十二烷基磺酸钠(SDS)、去氧胆酸钠等细胞膜破坏。浓度一般为1mg/ml。

  (三)机械破碎法,是指利用捣碎机、研磨器或匀浆器 等将细胞破碎开来。

  1. 高速组织捣碎:将材料配成稀糊状液,放置于筒内约1/3体积,盖紧筒盖,将调速器先拨至zui慢处,开动开关后,逐步加速至所需速度。此法适用于动物内脏组织、植物肉质种子等。

  2. 玻璃匀浆器匀浆:先将剪碎的组织置于管中,再套入研杆来回研磨,上下移动,即可将细胞研碎,此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机为高,适用于量少和动物脏器组织。

  (四)酶学破碎法,选用合适的酶,使细胞壁遭到破坏,进而在低渗溶液中将原生质体破碎开来。

  细菌细胞壁较厚,可采用溶菌酶处理效果更好。

  裂解液标准配方:50mM Tris-HCl(pH8.5~9.0), 2mM EDTA, 100mM NaCl, 0.5% Triton X-100, 1mg/ml溶菌酶。(溶菌酶在这个pH范围内比较好发挥作用) 。

  无论用哪一种方法破碎组织细胞,都会使细胞内蛋白质或核酸水解酶释放到溶液中,使大分子生物降解,导致天然物质量的减少,加入二异丙基氟磷酸(DFP)可以抑制或减慢自溶作用;加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性,加入苯甲磺酰氟化物(PMSF)也能清除蛋白水解酶活力,但不是全部,而且应该在破碎的同时多加几次。

  以上是细胞破碎的常见方法,更多相关问题,咨询超声波细胞破碎仪厂家